尿液怎么快速提取高纯度的外泌体?

以下是一些可以相对快速地从尿液中提取高纯度外泌体的方法及要点：

1、超速离心法

样本收集与预处理：收集新鲜尿液，一般建议收集晨尿，因为其成分相对稳定。将尿液在 4℃下以 3000g 离心 15 分钟，去除细胞和细胞碎片等大颗粒杂质，取上清液。

超速离心：将预处理后的上清液转移至超速离心管中，在 4℃下以 100,000g - 120,000g 超速离心 70 - 90 分钟，使外泌体沉淀在离心管底部。弃去上清液，用适量的 PBS 缓冲液重悬沉淀的外泌体。

二次超速离心：将重悬后的外泌体溶液再次以 100,000g - 120,000g 超速离心 70 - 90 分钟，进一步去除杂质，得到高纯度的外泌体。最后用适量的 PBS 缓冲液或其他合适的保存液重悬外泌体，置于 - 80℃保存。

2、密度梯度离心法

样本预处理：与超速离心法的第一步相同，先对尿液样本进行低速离心去除细胞等杂质。
密度梯度介质准备：常用的密度梯度介质有蔗糖、碘克沙醇等。根据所需的密度范围，配制不同浓度梯度的介质，一般从 1.10 g/mL 到 1.25 g/mL 逐步递增。

加样与离心：将预处理后的尿液上清液小心地铺在密度梯度介质之上，然后在 4℃下以 100,000g - 120,000g 离心 12 - 18 小时。外泌体由于其密度特性，会在不同密度层之间形成一个清晰的条带。

外泌体收集：用注射器或移液器小心地收集含有外泌体的条带，然后用 PBS 缓冲液稀释并离心，去除密度梯度介质，得到高纯度的外泌体。

3、磁珠免疫捕获法

磁珠准备：选择表面偶联有针对外泌体特异性标志物（如 CD63、CD81 等）抗体的磁珠。将磁珠悬浮在合适的缓冲液中，如 PBS - BSA 缓冲液，以防止磁珠非特异性吸附。

样本孵育：将预处理后的尿液上清液与磁珠充分混合，在 4℃下孵育 1 - 2 小时，使外泌体与磁珠表面的抗体特异性结合。

磁分离：使用磁力架将结合了外泌体的磁珠分离出来，弃去上清液。用 PBS 缓冲液多次洗涤磁珠，去除未结合的杂质。

外泌体洗脱：加入适量的洗脱液，如含有特定抗原的缓冲液或酸性缓冲液，在温和的条件下孵育 10 - 15 分钟，使外泌体从磁珠上洗脱下来。收集洗脱液，即为高纯度的外泌体。